Enzymgebundener Immunoassay von Schweinen β-menschlichem Choriongonadotropin (β-HCG)

Porcin-β-Human-Choriongonadotropin (β-HCG) Enzym-gebundenes Immunoassay-Kit-Bedienungsanleitung Dieses Kit dient nur zur Verwendung von Forschungsgebrauch.
Drogenname:
Generischer Name: Porcine Beta Human Chorionic Gonadotropin (β-HCG) ELISA-Kit

Nutzungszweck:
Dieses Kit wird zur Bestimmung des β-menschlichen Choriongonadotropin (β-HCG) in Schweinserum, Plasma und verwandten flüssigen Proben verwendet.

Versuchsprinzip:
Dieses Kit verwendet die doppelte Antikörper-Sandwich-Methode, um den Grad des β-Human-Choriongonadotropins (β-HCG) in der Probe zu bestimmen. Die mikroporösen Platten wurden mit gereinigtem β-humanischen Chorion-Gonadotropin (β-HCG) -Antikörper mit gereinigtem β-Human-Chorion mit Festphasen-Antikörpern beschichtet. Porcin-β-humanische Choriongonadotropin (β-HCG) und dann in Kombination mit HRP-markiertem menschlichem Villous Gonadotropin & bgr; (β-HCG) -Antikörper, um ein Antikörper-Antigen-Enzym-markiertes Antikörperkomplex zu bilden, und nach gründlichem Waken, das Substrat-TMB-TMB-TMB, ist das Substrat-TMB-TMB-TMB-TMBE-TMBE für die Farbentwicklung hinzugefügt. TMB wird unter der Katalyse des HRP -Enzyms in Blau umgewandelt und unter der Wirkung von Säure in das endgültige Gelb. Die Farbtiefe korreliert positiv mit dem menschlichen Villous Gonadotropin β (β-HCG) in der Probe. Die Absorption (OD-Wert) wurde mit einem Mikroplattenleser bei einer Wellenlänge von 450 nm gemessen, und die Konzentration des β-menschlichen Choriongonadotropins (β-HCG) in der Probe wurde durch eine Standardkurve berechnet.

Kit -Komposition:
1 20 -mal konzentrierte Waschlösung 30 ml × 1 Flasche 7 Stop -Lösung 6ml × 1 Flasche
2 Enzym -Etikett -Reagenz 6ml × 1 Flasche 8 Standard (270 & mgr; g / l) 0,5 ml × 1 Flasche
3 Enzym -Etikettbeschichtete Platte 12 Wells × 8 Streifen 9 Standardverdünnungen 1,5 ml × 1 Flasche
4 Probe Diluent 6ml × 1 Flasche 10 Anweisungen 1 Kopie
5 Entwickler eine Lösung 6ml × 1 Flasche 11 2 Versiegelungsfilm
6 Entwickler B Flüssigkeit 6ml × 1 / Flasche 12 Versiegelter Beutel 1

Probenanforderungen:
1. Proben werden so bald wie möglich nach der Sammlung extrahiert, und die Extraktion wird gemäß der relevanten Literatur durchgeführt, und es sollten Experimente so bald wie möglich nach der Extraktion durchgeführt werden. Wenn der Test nicht sofort durchgeführt werden kann, kann die Probe bei -20 ° C gespeichert werden, aber wiederholtes Gefrieren und Auftauen sollte vermieden werden
2. Die Proben, die NaN3 enthalten, können nicht nachgewiesen werden, da NaN3 die Meeresperadenperoxidase (HRP) -Aktivität hemmt.

Schritte:
1. Verdünnung und Belastung von Standardprodukten: Setzen Sie 10 Standardbohrungen auf die enzymbeschichtete Platte, geben Sie 100 μl der Standardprodukte in der ersten und zweiten Brunnen und fügen Sie dann die Standardprodukte in der ersten und zweiten Brunnen hinzu. 50 μl Verdünnungsmittel, gut mischen; Nehmen Sie dann 100 & mgr; l von der ersten Bohrung und der zweiten Vertiefung und fügen Sie sie in die dritte bzw. vierte Brunnen hinzu und fügen Sie dann 50 & mgr; l Standardverdünnungslösung in die dritte bzw. vierte Brunnen hinzu, mischen und verwerfen Sie es, fügen Sie dann jeweils 50 μl in die fünfte und sechste Brunnen und fügen Sie dann 50ul der Standardverdünnung in die fünfte bzw. sechste Brunnen hinzu und mischen Sie gut; Nehmen Sie nach dem Mischen 50 & mgr; l der fünften und sechsten Brunnen und fügen Sie sie in die siebte bzw. achte Brunnen hinzu. Fügen Sie dann 50 μl Standardverdünnungslösung zum siebten bzw. achten Brunnen hinzu. Nehmen Sie 50 μl aus den acht Brunnen und geben Sie sie in die neunte und zehnte Brunnen. Fügen Sie dann 50 μl der Standardverdünnungslösung zum neunten bzw. zehnten Brunnen hinzu. Nehmen Sie nach dem Mischen 50 & mgr; l von der neunten und zehnten Brunnen aus und verwerfen Sie sich. (Nach der Verdünnung beträgt das Volumen jeder Vertiefung 50 & mgr; l und die Konzentrationen betragen 180 & mgr; g / l, 120 & mgr; g / l, 60 & mgr; g / l, 30 & mgr; g / l, 15 μg / l).
2. Fügen Sie Proben hinzu: Legen Sie leere Brunnen ein (die Leer -Steuerbohrungen fügen keine Proben und Enzymreagenzien hinzu, die restlichen Schritte sind gleich) und die zu testenden Probenvertiefungen. Fügen Sie 40 & mgr; l Probenverdünnung zur Testprobenbohrung der enzymbeschichteten Platte hinzu und fügen Sie dann 10 & mgr; l der Testprobe hinzu (die endgültige Verdünnung der Probe beträgt 5 mal). Fügen Sie die Probe hinzu und fügen Sie die Probe zum Boden der Brunnen der Mikroplatte hinzu.
3. Inkubation: Versiegeln Sie die Platte mit dem Versiegelungsfilm und inkubieren Sie 30 Minuten lang bei 37 ° C.
4. Mischlösung: 20 -mal konzentriertes Waschflüssigkeit mit destilliertem Wasser 20 -mal verdünnen und reservieren
5. Waschen: Schälen Sie den Versiegelungsfilm vorsichtig ab, entsorgen Sie die Flüssigkeit, drehen Sie trocken, füllen Sie sie jeweils mit der Waschlösung, lassen Sie ihn 30 Sekunden lang stehen und entsorgen Sie sie, wiederholen Sie 5 Mal und tupfen Sie trocken.
6. Enzym hinzufügen: Fügen Sie jeweils 50 & mgr; l Enzym -Label -Reagenz in jede Vertiefung hinzu.
7. Inkubation: Die Operation ist der gleiche wie 3.
8. Waschen: Die Operation ist die gleiche wie 5.
9. Farbentwicklung: Fügen Sie 50 μl Entwickler A zu jeder Vertiefung hinzu und fügen Sie dann 50 μl Entwickler B hinzu, mischen Sie sanft und entwickeln Sie Farbe bei 37 ℃ im Dunkeln
15 Minuten.
10. Beendigung: Fügen Sie jeder Vertiefung 50 & mgr; l Stopplösung hinzu, um die Reaktion zu stoppen (zu diesem Zeitpunkt wird sich das Blau in gelb verwandelt).
11. Bestimmung: Messen Sie die Absorption (OD -Wert) jeder Vertiefung in der Sequenz mit der leeren Klimaanlage bei Null und 450 nm Wellenlänge. Die Messung sollte innerhalb von 15 Minuten nach dem Hinzufügen der Stopplösung durchgeführt werden.

Berechnung:
Zeichnen Sie die Konzentration des Standards als Abszisse und den OD -Wert als Ordinate, zeichnen Sie eine Standardkurve auf das Koordinatenpapier und ermitteln Sie die entsprechende Konzentration aus der Standardkurve gemäß dem OD -Wert der Probe; multiplizieren Sie mit dem Verdünnungsfaktor; oder verwenden Sie die Konzentration des Standards die lineare Regressionsgleichung der Standardkurve durch den OD -Wert, ersetzen Sie den OD -Wert der Probe in die Gleichung, berechnen Sie die Probenkonzentration und multiplizieren Sie sie mit dem Verdünnungsfaktor, um die tatsächliche Konzentration von der tatsächlichen Konzentration zu erhalten die Probe.
Vorsichtsmaßnahmen:
1. Das Kit sollte aus der gekühlten Umgebung herausgenommen und 15 bis 30 Minuten lang bei Raumtemperatur äquilibriert werden. Wenn die enzymbeschichtete Platte nach dem Öffnen nicht versiegelt ist, sollte der Streifen in einem versiegelten Beutel aufbewahrt werden.
2. Kristalle können in der konzentrierten Waschflüssigkeit ausgefällt werden, die während der Verdünnung erhitzt und in einem Wasserbad gelöst werden können, und die Ergebnisse werden während des Waschens nicht beeinträchtigt.
3. Der Sampler sollte bei jedem Schritt der Probenaddition verwendet werden, und die Genauigkeit sollte regelmäßig überprüft werden, um Testfehler zu vermeiden. Es ist am besten, die Stichprobenzeit innerhalb von 5 Minuten zu steuern. Wenn es viele Exemplare gibt, wird empfohlen, eine Volleypistole zu verwenden, um Proben hinzuzufügen.
4. Bitte erstellen Sie gleichzeitig eine Standardkurve bei jeder Messung. Es ist am besten, ein Doppelloch zu erstellen. Wenn der Inhalt der in der Probe getesteten Substanz zu hoch ist (der OD -Wert der Stichprobe ist größer als der OD -Wert der ersten Brunnen des Standardbohrungsvermögens), verdünnen Sie ihn bitte mit einem bestimmten Mehrfach (n -mal) von die Probenverdünnung und bestimmen sie dann. Multiple (× n × 5).
5. Der Versiegelungsfilm ist auf einmalige Verwendung beschränkt, um eine Kreuzkontamination zu vermeiden.
6. Bitte halten Sie das Substrat vom Licht fern.
7. Befolgen Sie die Anweisungen streng und die Testergebnisse müssen vom Mikroplattenleser bestimmt werden.
8. Alle Proben, Waschflüssigkeiten und verschiedene Abfälle sollten als Infektionsmittel behandelt werden.
9. Die Komponenten verschiedener Chargen dieses Reagenzs dürfen nicht gemischt werden.
10. Wenn es einen Unterschied zum englischen Handbuch gibt, muss das englische Handbuch herrschen.

Prüfungsbereich:
10 μg / l -200 & mgr; g / l
Spezifikation:
96 Portionen / Boxspeicherbedingungen und Ablaufdatum
1. Kitspeicher :; 2-8 ℃.
2. Gültigkeit: 6 Monate