Schwangerschaftstestzeit

Human Anti-HCG-Antikörper IgA (HCG-Iga) ELISA

Kit -Anweisungen für die Verwendung dieses Reagenz

Zweck: Dieses Kit wird verwendet, um den Gehalt an Anti-HCG-Antikörper-IgA (HCG-IgA) in menschlichem Serum, Plasma und verwandten Flüssigkeitsproben zu bestimmen.

Versuchsprinzip:
Dieses Kit verwendet die doppelte Antikörper-Sandwich-Methode, um den Grad des menschlichen Anti-HCG-Antikörper-IgA (HCG-IgA) in der Probe zu bestimmen. Mikroporöse Platten wurden mit gereinigtem humanem Anti-HCG-Antikörper-IgA-Antikörper (HCG-IgA) -Antikörper beschichtet, um Festphasen-Antikörper herzustellen. Der Anti-HCG-Antikörper-IgA (HCG-IgA) wurde zu den mit MAb beschichteten Mikrowellen gegeben und dann mit HRP markiert, den Ziegen-Anti-Human-Antikörper bindet an einen Antikörper-Antigen-Enzym-markierten Antikörperkomplex. Nach gründlichem Waschen wird das Substrat -TMB für die Farbentwicklung hinzugefügt. TMB wird unter der Katalyse des HRP -Enzyms in Blau umgewandelt und unter der Wirkung von Säure in das endgültige Gelb. Die Farbtiefe ist positiv mit dem Anti-HCG-Antikörper-IgA (HCG-IgA) in der Probe korreliert. Die Absorption (OD-Wert) wurde mit einem Mikroplattenleser bei einer Wellenlänge von 450 nm gemessen, und die Konzentration des menschlichen Anti-HCG-Antikörpers IgA (HCG-IgA) in der Probe wurde durch eine Standardkurve berechnet.

Kit -Komposition:
Kit -Komposition 48 Well Konfiguration 96 Well Konfiguration Speicheranweisungen 1 Teil 1 Teil Versiegelungsplattenfilm 2 Stücke (48) 2 Stücke (96)
Ein versiegelter Beutel und ein enzymmarkiertes Beschichtungsplatte 1 × 48 1 × 96 2-8 ℃ erhaltener Standard: 54pg / ml 0,5 ml × 1 Flasche 0,5 ml × 1 erhaltene Standardverdünnung 1,5 ml × 2-8 ℃ × 1 Flasche von 1,5 1,5 ml × 1 Flasche enzymmarkiertes Reagenzien, die bei 2-8 ℃ 3 ml × 1 Flasche 6 ml × 1 Flaschen Probenverdünnung bei 2-8 ℃ 3 ml × 1 Flasche 6 ml × 1 1 Flaschen Farbspeicher bei 2 gelagert wurden -8 ℃ Reagenz eine Lösung 3 ml × 1 Flasche 6 ml × 1 Flasche 2-8 ° C Lagerentwickler B-Lösung 3 ml × 1 Flasche 6 ml × 1 Flasche 2-8 ° C Speicherstopplösung 3ml × 1 Flasche 6 ml × 1 Flasche 2- Lagern Sie die konzentrierte Waschlösung bei 8 ℃ (20 ml × 20-mal) × 1 Flasche (20 ml × 30-mal) × 1 Flasche bei 2-8 ℃
1. Serum: Raumtemperatur Blut koaguliert natürlich 10-20 Minuten lang, zentrifugiert etwa 20 Minuten lang (2000-3000 U / min). Sammeln Sie den Überstand sorgfältig und zentrifugieren erneut, wenn während der Lagerung ein Niederschlag erscheint.
2. Plasma: EDTA oder Natriumcitrat sollte als Antikoagulans gemäß den Anforderungen der Probe ausgewählt werden, 10-20 Minuten gemischt und etwa 20 Minuten lang (2000-3000 U / min) zentrifugiert werden. Sammle den Überstand sorgfältig. Wenn ein Niederschlag während der Lagerung bildet, sollte er erneut zentrifugiert werden.
3. Urin: In sterilen Röhren gesammelt und etwa 20 Minuten lang zentrifugiert (2000-3000 U / min). Sammle den Überstand sorgfältig. Wenn sich während der Lagerung ein Niederschlag bildet, zentrifugieren Sie sich erneut. Pleura und Aszites, Implementierung der Cerebrospinalflüssigkeit.
4. Zellkulturüberstand: Wenn Sie sekretierte Komponenten nachweisen, sammeln Sie mit einem sterilen Röhrchen. Zentrifuge für ca. 20 Minuten (2000-3000 U / min). Sammle den Überstand sorgfältig. Wenn Sie die Komponenten in den Zellen nachweisen, verdünnen Sie die Zellsuspension mit PBS (pH7.2-7.4), und die Zellkonzentration erreicht etwa 1 Million / ml. Durch wiederholtes Gefrieren und Auftauen werden die Zellen zerstört und die intrazellulären Komponenten freigesetzt. Zentrifuge für ca. 20 Minuten (2000-3000 U / min). Sammle den Überstand sorgfältig. Wenn ein Niederschlag während der Lagerung bildet, sollte er erneut zentrifugiert werden.
5. Organisieren Sie das Exemplar: Wiegen Sie nach dem Schneiden des Probens es. Fügen Sie eine bestimmte Menge PBS hinzu, Ph7.4. Schnell einfrieren und sparen Sie mit flüssigem Stickstoff für die spätere Verwendung. Nach dem Schmelzen des Probens hält es immer noch eine Temperatur von 2-8 ° C. Fügen Sie eine bestimmte Menge PBS (PH7.4) hinzu und homogenisieren die Probe mit einem Handbuch oder Homogenisator. Zentrifuge für ca. 20 Minuten (2000-3000 U / min). Sammle den Überstand sorgfältig. Nach dem Aliquotieren soll ein Teil getestet werden, und der Rest ist für die zukünftige Verwendung eingefroren.
6. Die Probe sollte so schnell wie möglich nach der Sammlung extrahiert werden. Die Extraktion sollte gemäß der relevanten Literatur durchgeführt werden. Das Experiment sollte so schnell wie möglich nach der Extraktion durchgeführt werden. Wenn der Test nicht sofort durchgeführt werden kann, kann die Probe bei -20 ° C gespeichert werden, aber wiederholtes Gefrieren und Auftauen sollte vermieden werden.
7. Die Probe, die Nan3 enthält, kann nicht nachgewiesen werden, da NaN3 die Aktivität von Meerrettichperoxidase (HRP) hemmt.
Schritte:
1. Verdünnung und Belastung von Standardprodukten: Setzen Sie 10 Standardbohrungen auf die enzymbeschichtete Platte, geben Sie 100 μl der Standardprodukte in der ersten und zweiten Brunnen und fügen Sie dann die Standardprodukte in der ersten und zweiten Brunnen hinzu. 50 μl Verdünnungsmittel, gut mischen; Nehmen Sie dann 100 & mgr; l von der ersten Bohrung und der zweiten Vertiefung und fügen Sie sie in die dritte bzw. vierte Brunnen hinzu und fügen Sie dann 50 & mgr; l Standardverdünnungslösung in die dritte bzw. vierte Brunnen hinzu, mischen und verwerfen Sie es, fügen Sie dann jeweils 50 μl in die fünfte und sechste Brunnen und fügen Sie dann 50ul der Standardverdünnung in die fünfte bzw. sechste Brunnen hinzu und mischen Sie gut; Nehmen Sie nach dem Mischen 50 & mgr; l der fünften und sechsten Brunnen und fügen Sie sie in die siebte bzw. achte Brunnen hinzu. Fügen Sie dann 50 μl Standardverdünnungslösung zum siebten bzw. achten Brunnen hinzu. Nehmen Sie 50 μl aus den acht Brunnen und geben Sie sie in die neunte und zehnte Brunnen. Fügen Sie dann 50 μl der Standardverdünnungslösung zum neunten bzw. zehnten Brunnen hinzu. Nehmen Sie nach dem Mischen 50 & mgr; l von der neunten und zehnten Brunnen aus und verwerfen Sie sich. (Nach der Verdünnung beträgt das Volumen jeder Vertiefung 50 & mgr; l und die Konzentrationen betragen 36pg / ml, 24pg / ml, 12pg / ml, 6pg / ml, 3pg / ml).
2. Fügen Sie Proben hinzu: Legen Sie leere Brunnen ein (die Leer -Steuerbohrungen fügen keine Proben und Enzymreagenzien hinzu, die restlichen Schritte sind gleich) und die zu testenden Probenvertiefungen. Fügen Sie 40 & mgr; l Probenverdünnung zur Testprobenbohrung der enzymbeschichteten Platte hinzu und fügen Sie dann 10 & mgr; l der Testprobe hinzu (die endgültige Verdünnung der Probe beträgt 5 mal). Fügen Sie die Probe hinzu und fügen Sie die Probe zum Boden der Brunnen der Mikroplatte hinzu.
3. Inkubation: Versiegeln Sie die Platte mit dem Versiegelungsfilm und inkubieren Sie 30 Minuten lang bei 37 ° C.
4. Mischlösung: 30 -mal (20 -mal 48 t) Konzentrierte Waschflüssigkeit mit destilliertem Wasser 30 -mal (20 -mal 48 t) und dann verwenden.
5. Waschen: Schälen Sie den Versiegelungsfilm vorsichtig ab, entsorgen Sie die Flüssigkeit, drehen Sie trocken, füllen Sie sie jeweils mit der Waschlösung, lassen Sie ihn 30 Sekunden lang stehen und entsorgen Sie sie, wiederholen Sie 5 Mal und tupfen Sie trocken.
6. Enzym hinzufügen: Fügen Sie jeweils 50 & mgr; l Enzym -Label -Reagenz in jede Vertiefung hinzu.
7. Inkubation: Die Operation ist der gleiche wie 3.
8. Waschen: Die Operation ist die gleiche wie 5.

9. Farbentwicklung: Fügen Sie 50 μl Entwickler A zu jeder Vertiefung hinzu und fügen Sie dann 50 & mgr; l Entwickler B hinzu, mischen Sie sie sanft und zeigen Sie im Dunkeln 15 Minuten bei 37 ° C.
10. Beendigung: Fügen Sie jeder Vertiefung 50 & mgr; l Stopplösung hinzu, um die Reaktion zu stoppen (zu diesem Zeitpunkt wird sich das Blau in gelb verwandelt).
11. Bestimmung: Messen Sie die Absorption (OD -Wert) jeder Vertiefung in der Sequenz mit der leeren Klimaanlage bei Null und 450 nm Wellenlänge. Die Messung sollte innerhalb von 15 Minuten nach Zugabe der endgültigen Lösung durchgeführt werden.
Vorsichtsmaßnahmen:
1. Das Kit sollte 15-30 Minuten bei Raumtemperatur äquilibriert werden, bevor sie aus der gekühlten Umgebung herausgenommen werden. Wenn die beschichtete Platte der Enzym -Etikett nicht geöffnet ist, sollte der Streifen in einem versiegelten Beutel gelagert werden.
2. Kristalle können in der konzentrierten Waschflüssigkeit ausgefällt werden, die während der Verdünnung erhitzt und in einem Wasserbad gelöst werden können, und die Ergebnisse werden während des Waschens nicht beeinträchtigt.
3. Der Sampler sollte bei jedem Schritt der Probenaddition verwendet werden, und die Genauigkeit sollte regelmäßig überprüft werden, um Testfehler zu vermeiden. Es ist am besten, die Stichprobenzeit innerhalb von 5 Minuten zu steuern. Wenn es viele Exemplare gibt, wird empfohlen, eine Volleypistole zu verwenden, um Proben hinzuzufügen.

4. Bitte erstellen Sie gleichzeitig eine Standardkurve bei jeder Messung. Es ist am besten, ein Doppelloch zu erstellen. Wenn der Inhalt der in der Probe getesteten Substanz zu hoch ist (der OD -Wert der Stichprobe ist größer als der OD -Wert der ersten Brunnen des Standardbohrungsvermögens), verdünnen Sie ihn bitte mit einem bestimmten Mehrfach (n -mal) von die Probenverdünnung und bestimmen sie dann. Multiple (× n × 5).
5. Der Versiegelungsfilm ist auf einmalige Verwendung beschränkt, um eine Kreuzkontamination zu vermeiden.
6. Bitte halten Sie das Substrat vom Licht fern.
7. Befolgen Sie die Anweisungen streng und die Testergebnisse müssen vom Mikroplattenleser bestimmt werden.
8. Alle Proben, Waschflüssigkeiten und verschiedene Abfälle sollten als Infektionsmittel behandelt werden.
9. Die Komponenten verschiedener Chargen dieses Reagenzs dürfen nicht gemischt werden.
10. Wenn es einen Unterschied zum englischen Handbuch gibt, muss das englische Handbuch herrschen.
Berechnung:
Zeichnen Sie die Konzentration des Standards als Abszisse und den OD -Wert als Ordinate, zeichnen Sie eine Standardkurve auf das Koordinatenpapier und ermitteln Sie die entsprechende Konzentration aus der Standardkurve gemäß dem OD -Wert der Probe; dann mit dem Verdünnungsfaktor multiplizieren; Berechnen Sie die lineare Regressionsgleichung der Standardkurve durch den OD -Wert, ersetzen Sie den OD -Wert der Probe in die Gleichung, berechnen Sie die Probenkonzentration und multiplizieren Sie sie mit dem Verdünnungsfaktor, um die tatsächliche Konzentration der Probe zu erhalten.

(Dieses Bild dient nur als Referenz)

Kit -Leistung:
1. Der Korrelationskoeffizient R zwischen der linearen Regression der Probe und der erwarteten Konzentration beträgt mehr als 0,990.
2. Die Charge und die Genehmigung müssen weniger als 9% bzw. 11% betragen
Prüfungsbereich:
1pg / ml -45pg / ml
Speicherbedingungen und Gültigkeitsdauer:
1. Speichern Sie das Kit: 2-8 ℃.
2. Gültigkeit: 6 Monate